Biotin-11-ddUTP 用于寡核苷酸标记 的原理是什么

Connor 2026-07-31 阅读:1

标题:Biotin-11-ddUTP

一、化学试剂的基本信息

保存条件:避光、-20°C储存,避免反复冻融

英文名称:Biotin-11-ddUTP

中文名称:生物素-11-脱氧尿苷三磷酸

CAS号:86303-25-5

分子式:C28H42N6O17P3SNa3(三钠盐形式)

分子量:约 927.6 g/mol(三钠盐)

规格标准:该试剂的纯度通常达到95%以上,规格包括1mg、5mg、10mg等,也可按需包装。

生产信息:陕西新研博美

Biotin-11-ddUTP 用于寡核苷酸标记 的原理是什么

二、基本定义

Biotin-11-dUTP(生物素-11-脱氧尿苷三磷酸)是一种结合了生物素(Biotin)与脱氧尿苷三磷酸(dUTP)的非放射性标记核苷酸。

核心作用:在DNA合成过程中,它能够替代天然的 dTTP(脱氧胸苷三磷酸)被酶促掺入到新合成的DNA或cDNA链中,从而实现对核酸分子的非放射性生物素标记。

经典应用:广泛应用于PCR扩增标记、缺口平移(Nick Translation)、随机引物标记、cDNA合成以及3'末端标记等。标记后的DNA探针常用于Southern印迹、Northern印迹、原位杂交(FISH)、微阵列芯片以及TUNEL细胞凋亡检测等实验。

检测原理:掺入DNA的生物素基团能与链霉亲和素(Streptavidin)或抗生物素蛋白(Avidin)发生极强的特异性结合。通过偶联了辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)或荧光基团的链霉亲和素,即可实现对目标核酸的高灵敏度检测与可视化。

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�� 结构特点

双功能模块:

dUTP骨架:作为DNA合成的底物,其尿嘧啶碱基能够与模板链上的腺嘌呤(A)进行正常的碱基配对,从而被DNA聚合酶识别并掺入到新合成的DNA链中。

生物素(Biotin):一种维生素衍生物,作为后续检测的“手柄”,能与链霉亲和素形成极其稳定的复合物。

11原子连接臂(Spacer arm):在dUTP的尿嘧啶C5位与生物素之间,通过一个由11个原子组成的连接臂相连。这个长度的连接臂能有效减少生物素大分子基团对DNA聚合酶催化活性的空间位阻,同时保证掺入后生物素能充分暴露,便于与链霉亲和素高效结合。

三、Biotin-11-ddUTP 用于寡核苷酸标记 的原理

标记原理

酶促掺入机制:

Biotin-11-ddUTP/dUTP 的核心原理是利用其分子结构,使其能够作为dTTP(脱氧胸苷三磷酸)或dUTP的天然类似物,在DNA聚合酶或逆转录酶的催化下,被掺入到新合成的DNA/RNA链中,从而替代天然的dTTP或dUTP。

3'-末端标记:对于单链寡核苷酸,常使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。该酶可在3'端无需模板指导的情况下,将Biotin-11-dUTP(或UTP)逐个添加到寡核苷酸的3'-OH基团上。

内部标记:在PCR、缺口平移(Nick-translation)、随机引物标记或cDNA合成过程中,Biotin-11-dUTP可被DNA聚合酶直接掺入到扩增产物的内部位点,替代dTTP。

连接臂(Linker)设计:

名称中的“11”表示生物素分子与核苷酸骨架(dUTP)之间通过一个11个原子长的柔性连接臂(spacer arm)相连。

这一较长的连接臂设计至关重要,它确保生物素标签在空间上远离核酸骨架,避免由于位阻效应干扰核酸与目标序列的杂交或与蛋白质的结合。

同时,该长度也被证明是最优的,能最大化生物素与链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)之间的结合效率。

四、新研博美目录列表:

FerroOrange (Fe2+ indicator)

AF 343 (Coumarin) X NHS ester

AF594 DBCO,Alexa Fluor 594 DBCO

AF594 azide ,Alexa Fluor 594 N3

Rhodamine Green NHS,罗丹明绿-活性酯

Cyanine2 amine,Cy2 NH2,Cyanine2氨基

Methylsilatrane

Phenyl Dimethyl Chlorosilane

Phenyl Tris(Dimethylsiloxy)Silane

NOTA-PEG-Mal,MW:5000

NOTA-C6-amine,NOTA-C6-NH2

DOTA-(COOt-Bu)3-CH2-Ph-azide

DOTA-E[c(RGDyK)2],DOTA-E[c(RGDyK)2]

DSPE-DBCO

DSPE-Alkyne

DSPE-PEG12-COOH

DSPE-PEG10-NHS ester

温馨提示:

试剂仅用于科研实验,不可用于人体~~~~~编辑作者:陕西新研博美木南

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